详解新抗原

新抗原(neoantigen),即突变蛋白产生的抗原和致瘤病毒整合进基因组产生的抗原，属于肿瘤特异性抗原范畴。本节着重阐述在肿瘤细胞形成过程中，由正常基因突变产生的抗原。随着基因组学、蛋白质组学的发规，人们可利用生物信息学的方法对突变的基因进行分析，预测出可能和MHC结合的对应肽段，即对应的抗原表位，其被T细胞识别后，发挥特异性杀伤作用。有研究表明，在小鼠和人体内CD4+和CD8+T细胞都能特异性识别新抗原表位。新抗原为肿瘤特异性抗原，正常组织不表达，并且无中枢性T细胞耐受性，是近年来肿瘤抗原领域最受瞩目的抗原类别。

肿瘤细胞的突变在各系统肿瘤中的频率高低有别，在黑色素瘤、肺癌、食管癌、胃癌、肠癌等肿瘤组织中有较髙水平的突变。以新抗原为基础的个体化免疫治疗有以下几种模式(图3-1)。一是新抗原作为肿瘤治疗性疫苗，包括肽疫苗、RNA疫苗、DC疫苗等形式，诱发和增强体内针对这类特异性抗原的免疫反应，从而去杀伤表达这类抗原的靶细胞。有研究表明，荷瘤小鼠体内注射新抗原疫苗，可控制肿瘤增长。 Carreno等发现，利用新抗原制备的肿瘤疫苗，其既可以产生对新抗原的主动免疫，又能增强T细胞的抗肿瘤效应。这为新抗原制备肿瘤疫苗进一步走向临床提供了依据。二是以新抗原为基础的过继性细胞免疫治疗，包括分选扩增新抗原特异性T细胞、获取新抗原特异性T细胞的TCR 转染T细跑、制备针对肿瘤表面提呈的新抗原的CAR-T细胞等。目前，新抗原为基础的过继性细跑免疫治疗在恶性黑色素瘤、淋巴瘤、卵巢癌及胆管癌中取得较好的疗效。 2014年，Rosenberg团队通过对病灶的全基因组测序筛选出可能的新抗原，制备特异性T 细跑治疗一名转移性胆管癌患者，该患者在治疗一周期后就达到了部分缓解。三是新抗原与其他常规祌瘤治疗模式的联合，如肿瘤放射治疗、化疗、免疫卡控点阻滞剂等，增加新抗原在免疫系统的暴露，调节肿瘤免疫微环境，发挥协同作用。无论使用何种策略、何种模式来增强肿瘤特异性T细胞反应性，靶向多个新抗原显得至关重要，以防止肿瘤细胞通过改变涉及的突变表位，发生肿瘤逃逸。此外，还需避免靶向自身免疫疾病相关的突变基因，以免诱导或加重癌症相关的自身免疫性疾病。

目前临床较常见，研究较多的突变基因是EGFR和KRAS。EGFR基因由28个外显子组成，编码1186个氨基酸，位于人类染色体7p13—q22区，其编码的蛋白是ErbB受体家族的成员之一，位于细胞表面，能被特异性的配体如表皮生长因子激活。目前已知的EGFR基因突变常见于第19位外显子的缺失、L858R、T790M、G719X、L861Q、S768I、第20 位外显子的插入等，以前两者居多，占所有突变的90%，这些突变引起EGFR蛋白过表达或活性过强，可能与多种恶性肿瘤的发生有关，包括非小细胞肺癌、直肠癌、多形性胶质细胞瘤等。因此，EGFR基因突变可以作为恶性肿瘤治疗的靶标。

Kras基因是一种原癌基因，长约35kb，位于12号染色体，是ras基因家族成员之一，编码Kras蛋白。Kras基因分为突变型和野生型，常见的突变位点位于Kras基因2号外显子的12号密码子和13号密码子及3号外显子的61号密码子,其中有7个突变热点：G12C、 G12R、G12S、G12V、G12D、G12A、G13V/D,占 Kras基因总突变的90%以上。据报道，体细胞Kras基因突变与多种人类恶性肿瘤，如肺癌、白血病、胰腺癌、结直肠癌等有关。近年来，有研究表明，通过噬菌体肽库展示技术制备出针对KRAS G12VHLA限制性的胞外段的抗体，有望进一步设计出针对KRAS G12V突变位点HLA限制性的CAR-T,可能有很好的临床应用前景。