转基因小鼠技术

肿瘤单克隆抗体的制备还可以通过动物转甚因技术来实现,其原理为将外源粑基因导入受体动物早期胚胎细胞中，使得该动物通过对外源基因的处理，具有特殊的表现形式或功能，从而构建出新的动物品系。动物转基因技术已经成功应用于多种动物，如牛、羊、猪、兔、鸡等。小鼠因具有使用成本低、孕期短、繁殖能力强、与人体进化相似性高等方面的优势，是迄今最为广泛应用于人类疾病研究的模式生物。转基因小鼠技术最初是由 Gordon在20世纪80年代初创立的,该技术主要是将外源基因通过不同的方法导入小鼠受精卵，然后产生携带外源基因的小鼠品系。该技术的优点在于能在活体动物整体水平下观察所转入基因的生物学功能、组织内的表达情况、调控过程等。

目前，常用的转甚因技术方法有显微注射法、精子载体法、逆转录病毐感染法、转基因体细胞核移植法等。转人Ig基因组小鼠的构建较为复杂，需多次应用转基因技术和胚胎操作技术，基因敲除为核心，传统的构建过程如下述几个方面。①应用基因敲除技术敲除编码小鼠Ig轻链、重链的基因，构建轻重链双失活的小鼠，然后将其子代多次交配，最终筛选出双失活但保留所有调控Ig基因重排和表达的反式作用序列的小鼠。②采用多步法构建酵母人工染色体(yeast artificial chromosomes,YACs)。③构建好的YACs通过原生质体融合的方法导入小鼠ES细胞，经筛选后可得到分别还有重链和轻链YACs的ES细胞。④将上述筛选的ES细胞显微注射于小鼠囊胚，经体外培养后植入假孕鼠子宫，随后对受精卵发育成的子代进行基因分析鉴定，筛选出分别携带有人Ig重链、轻链的小鼠，再与Ig基因失活小鼠交配，得到的两系子代小鼠再经互交后产生的即为转人Ig基因小鼠。