抗肿瘤免疫反应检测指标

肿瘤免疫治疗，特别是过继性细胞治疗和免疫卡控点治疗在临床上已表现出很好的治疗过程中需要相关免疫指标预测免疫反应。本章简要分析近几年过继性细胞治疗相关临床试验，分析免疫指标检测在临床试验中的应用，总结与临床预后相关的指标。

临床试验中免疫反应检测指标

肿瘤浸润性淋巴畑胞

大量研究表明，回输的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的数量和成分及在休内存活时间和临床疗具有相关性。Dudley等报道了第一个TIL临床试验，入组的13例获得部分缓解。随后，将入组患者扩大到35例，发现肿瘤缩小和回输的TIL在体内存活时见具有显著的相关性，且存活时见长的TIL克隆表达水平较高的共刺激分子CD27和CD28和较长长度的端粒酶。Besser等利用短期培养的年轻型TIL治疗8例恶黑患者，结果1例完全缓解、2例部分缓解、4例疾病稳定，初步证实了短期培养TIL技术的可行性和有效性，虽然入组患者例数很少，但是临床结果还是令人鼓舞的。有研究发现，TIL培养时间较短的患者更易见到临床疗效,具有较少分化状态和较长端粒酶的CD27+TIL与良好的临床疗效有关。也有研究发现，CD27+的表达水平和临床疗效没有相关性，而与较高比例的BTLA+TIL细胞具有相关性，与其他共抑制分子PD-1、LAG-3、TIM-3的表达水平亦没有相关性。未来的临床实践，要进一步确定能正确反映TIL分化状态的表面标志， 联合其他指标更好地预测临床疗效。

临床研究中对于TIL功能的检测，多是利用自体肿瘤细胞或负载相应抗原多肽的自体 DC或工具细胞刺激TIL,通过检测上清中IFN-γ的分泌评估其功能。FN-Y分泌水平最初是用来选择反应性高的TIL用于临床回输，研究发现，经过这种方法筛选的TIL和临床获益具有相关性。但也有研究发现，TIL体外抗肿瘤能力和临床反应无相关性。 Ellebaek等发现经TIL治疗的患者临床获益与回输较高比例的抗原特异性CD8+T细胞相 关，且发现在一例完全缓解的患者中，其外周血CD3+和CD8+分泌较髙水平的IFN-y和 TNF-α。另一项研究结果初步显示以分泌Th1为主的TIL治疗是有利于临床获益的。

总结TIL临床实验，初步总结临床疗效有关的几个参数：体外培养时间，CD8+T细胞的数量及分化状态，CD8+T细胞上共抑制分子的表达，CD8+T细胞细胞因子分泌特征，细胞回输后在体内存活时间，见表8-3。

嵌合抗原受体T细胞技术

第—代嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)技术应用靶向碳酸酐酶IX抗原治疗肾癌，由于CAIX抗原也表达在胆管细胞上，最初的3例患者中有2例出现了肝炎症状并产生了抗CAR免疫反应，导致CAR细胞在体内不易长期存活;随后的4例预先用細CAIX单克隆抗体治疗，虽然有效防止了肝炎和抗CAR免疫反应的发生，但没有观察到明显的临床疗效。靶向卵巢癌相关抗原α叶酸受体的第一代CAR-T细胞治疗卵巢癌，回输的CAR-T在体内存活时间很短，入组的14例患者均没有出现明显的临床疗效。 第一代CAR-T在细胞扩增、体内存活时间及细胞因子分泌等方面存在缺陷，临床疗效并没有达到预期的效果，但是它们建立了 CAR-T细胞过继性回输的可行性和安全性的标准。

第二代CAR-T技术加入了共刺激分子CD137或CD28,提高了T细胞的毒性并延长了在体内的存活时间。第二代CAR-T细胞在临床研究中的应用最多。Juno公司利用靶向 CD19的二代CAR-T(CD3和CD137信号域)治疗了3例慢性淋巴细胞白血病，研究发现，CAR-T不仅在体内扩增了1000倍以上，而且在血液和骨髓中的存活时间也超过了 6 个月，分涵细胞,因子如IFN-y和CXCL9也较治疗前显著增高，接受治疗的3例患者中，2例达到元全缓解，1例达到部分缓解，临床疗效得到肯定。另—项研究用靶向CD19的二代CAR-T(CD3和CD28信号域)治疗5例复发的急性B细胞性白血病患者，5例患者均出现临床反应，肿瘤迅速缩小。引入了CD28的二代CAR-T技术增强了T细胞在体内扩增能力和存活时见，成为预测CAR-T治疗有效性的免疫标志。对于实体瘤治疗，CAR-T细胞靶向并浸润到瘤内也是一个重要的检测指标，虽然这项检测指标只在较少的临床试验中被利用。通过增加CAR-T肝素酶的表达大幅增加了对实体肿瘤的渗透，可增强CAR-T对实体瘤的抗肿瘤疗效。

总结CAR-T临床试验，T细胞回输体内后的扩增与持续存在，是CAR-T治疗临床获益重要因素，除此之外，CAR-T的设计、回输中T细胞组成比例、瘤内浸润程度也与临床反应有相关性。

T细胞受体工程化T细胞技术

第一个T细胞受体工程化T细胞(TCR-T)技术临床试验利MART-1/HLA-A2治疗恶黑患者，入组的17例患者中有2例出现客观临床反应，且治疗1年后在体内还能检测到回输的TCR-T细胞，虽然TCR-T临床缓解率低于TIL治疗，但是为不能获取肿瘤组织进行TIL治疗的患者提供了另外一种治疗方法。另一项研究利用高亲和力的MART-1和针对gp-100/HLA-A2的TCR-T治疗恶黑患者，客观缓解率分别达到30%和19%，随后的研究中发现，临床获益患者在治疗一个月后，在体内均可检测到较高水平的TCR-T，但是在一些无临床反应的患者中也检测到较高水平的TCR-T，说明TCR-T在体内的存活时见和临床疗效相关，但不是独立预后因素。

肿瘤免疫治疗成功的关键是选择理想的肿瘤抗原作为靶标，肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1在大约70%~80%的滑膜肉瘤和25%的恶黑患者中表达，有研究开展了将NY-ESO-1基因转入人外周淋巴细胞治疗恶黑和滑膜肉瘤的临床试验，入组了表达NY-ESO-1抗原的20例恶黑和18例滑膜肉瘤患者，结果显示分别有11例患者经过治疗后达到临床缓解，研究中，利用四聚体技术和酶联免疫斑点法检测TCR-T细胞的功能，发现临床疗效和T细胞功能没有相关性，反而和回输的T细胞数量具有一定的相关性。

总结TCR-T临床试验，初步发现抗原的选择和T细胞在体内存活时间被认为是重要的检测指标。